细胞培养技术和培养箱介绍

1  基本要求     
(1) 掌握细胞培养概念、细胞培养箱分类、基本原理和基本结构。 (2) 熟悉细胞培养技术。 
(3) 了解细胞培养箱常见故障处理及仪器的进展。 
2  重点难点     
(1) 细胞培养概念、细胞培养技术。 
(2) 细胞培养箱分类、基本原理、基本结构和使用方法。 
3  讲授学时     
建议4学时 
4  内容提要     
4.1 概述 
4.1.1 培养细胞的类型及其特点 
分为贴附型和悬浮型两大类。具有接触抑制和密度抑制的特性。 4.1.2 培养细胞的增殖过程 
传代(passage 或subculture)。从体内取出细胞接种培养到第一次传代叫原代培养,原代细胞一经传代后便称为细胞系(cell line)。 4.1.3 培养细胞的环境 
培养细胞需要特定的培养基和培养设备。培养细胞在培养皿或培养瓶中生长,浸浴于培养液,并需要特有的环境,包括一定的温度、湿度和气体成分。 
4.2细胞培养的技术 
4.2.1  细胞分离和原代(初代)培养 
(1)细胞悬液的制备  (2) 原代培养 (3)标本接种 4.2.2 培养细胞的传代   (1)次代细胞培养  (2)传代
4.3细胞培养微生物污染的检测    
4.3.1  霉菌和细菌污染   霉菌和细菌污染较易发现,细胞生长停止并有中毒表现。 
4.3.2  支原体污染  支原体污染是一个常见而又棘手的问题,它可致细胞增殖缓慢,甚至从培养器皿脱落。用能与DNA特异性结合的荧光染料Hoechst 33258使支原体DNA着色,置荧光显微镜下观察,可见散在于细胞周围或附于细胞膜表面的亮绿色小点为支原体污染. 
4.4 细胞培养技术的应用 
4.4.1  细胞融合 细胞融合最典型的应用是单克隆抗体技术。 4.4.2  核移植   4.4.3  基因转移 
4.4.4 细胞治疗与组织工程 
4.5. 电热恒温培养箱 
4.5.1  电热恒温培养箱结构和原理 
4.5.2  电热恒温培养箱使用注意事项 最重要的是隔水层的加水和智能控温仪的温度设定 
4.6.1 据其工作原理  CO2培养箱可以分为气套式CO2培养箱、水套式CO2培养箱、红外CO2培养箱、高温灭菌培养箱、湿度可控大温度范围培养箱、大容量培养箱等。 
4.6.2 CO2培养箱的结构特点和使用 结构核心部分主要是CO2调节器、温度调节器和湿度调节装置 4.6.3 CO2培养箱的进展 
4.7.1 厌氧培养箱的厌氧状态产生 厌氧培养箱是通过催化除氧系统和自动连续循环换气系统保持箱内的厌氧状态。 
4.7.2 厌氧培养箱的结构与使用 由手套操作箱和传递箱两个部分组成,操作箱内还附有小型恒温培养箱。

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