加强厌氧菌技术介绍

一、临床细菌室开展厌氧细菌培养的必要性。 
  1.厌氧菌感染的广泛性:厌氧菌是一大群在无氧环境下生长的细菌。厌氧细菌学是研究微观生态平衡、失调和调整的重要部分,在消化道菌群中,99.9%以上为厌氧菌,组成了重要的膜菌群,在生物拮抗、营养、免疫等方面具有不可估量的生理意义。 
近10年来,无芽胞厌氧杆菌及球菌是细菌性感染的重要原因之一,当深部脓肿、败血症等常规细菌学检查阴性时,往往源于厌氧菌感染。厌氧菌感染是一种内源性感染,病种遍及临床各科,人体的各个部位,各种器官均可发生厌氧菌感染。据广献报道。在菌血症中有10%可检出厌氧菌,在牙源性口面部感染病例中有94%,在吸入性肺炎及肺脓肿时有93%,在妇产科各种感染性疾病中有100%,直肠周围脓肿有77%可检出厌氧菌,而且有相当一部分病例是单一的厌氧菌感染。 
  2.厌氧菌感染在诊断和治疗上的特殊性:检出厌氧菌须具备必要的条件,如有特殊的厌氧培养系列,包括特殊采样方式、培养基、鉴定试剂及设备等。一旦确诊厌氧菌感染,在治疗也有其特殊性。 
  临床常用的氨基糖苷类抗生素,磺胺类药物对厌氧菌无效。脆弱类杆菌由于产生β内酰胺酶可对青霉素、头孢菌类β内酰胺抗生素耐药。为了有效控制临床感染性疾病,首先必须明确感染源,是需氧菌还是厌氧菌,因此临床细菌室有必要把厌氧菌培养作为常规细菌检验。 
二、临床细菌室开展厌氧菌培养现状 
  1. 根据我室1997-2001年调查结果表明:我国100家临床细菌室开展厌氧 菌培养的情况:从未开展厌氧菌培养的占77%,未作为常规项目的占10%,不规范开展的占8%,能作为常规项目,并规范开展的仅占5%。 
  2. 我国厌氧菌培养设备病状:约95%以上的细菌室没有厌氧手套箱,在能开展厌氧菌培养的实验室中约98%实验室用厌氧缺罐作为厌氧检测设备。极个别的实验室具备用气相色谱仪鉴定菌种。有90%实验室无鉴定厌氧菌的设备。几乎所有临床细菌室均不开展厌氧菌药敏试验。 
  3. 采样方式:采样应规范、正确。但有些实验室用新鲜羊血琼脂代替厌氧培养基;用注射器作为厌氧菌输送厌氧培养标本的工具。这种操作模式,从标本离开人体到厌氧环境可能会使70%-80%的厌氧菌已不能存活。建议应尽量采纳床边采样方式,或用厌氧输送培养基,解决标本不能立即送检的问题。有自动血培养分析仪的实验室,应充分利用设备中厌氧血培养瓶检测血液、浓液等无菌体液中的厌氧菌,但应注意勿将注射器中的气体注入瓶内。 
三、临床细菌室开展厌氧培养的可行性 
  1. 临床医生已认识到厌氧菌在感染性疾病的重要性,能认真采样和送检,并能识别厌氧菌感染的重要特征,如感染局部产生气体,分泌物有恶臭、带血或呈黑色,感染部位在肛门、口腔、鼻窦、咽颊等粘膜周围;有菌血症表现,但细菌培养阴性,长期使用氨基糖甙类抗生素无效者。 
  2. 临床医生一般希望通过细菌检验报告尽快证实有无厌氧菌感染,而不是某一种菌,因此,每个实验室应加强厌氧菌的分离,再根据条件建立简易鉴定流程或复杂流程;或以涂片方式报告,如革兰阳性厌氧球菌、厌氧杆菌;革兰阴性厌氧杆菌、厌氧球菌。有条件的实验室可在耐氧试验阳性的菌株中进一步鉴定,以确定菌种类型。 
  3. 厌氧菌培养分离、鉴定,试剂的商品化,减轻了实验室准备试剂的负担。如价廉、简易的厌氧培养系统,厌氧盒为600-1000元/个;可靠的厌氧鉴定系统如API、VITEK及其他细菌鉴定系统均具有厌氧菌鉴定功能。自动化血培养分析系统均有厌氧血培养瓶,便于血、胸腹水等无菌体液的厌氧菌培养。 
  4. 美国临床实验室标准化委员会已推荐出可作为厌氧菌药敏试验的方法,如浓度梯度(Etest)法、琼脂稀释法等。当用常规厌氧菌药物治疗无效时,可做药敏试验,用于纠正原有方案。 
四、临床细菌室要不断完善,以适应临床需要 
  1. 临床细菌室工作人员要提高对厌氧细菌的检测技术,要熟悉常见厌氧菌的分类学及进展。要了解厌氧细菌在人体各部位的正常菌群和常见的厌氧致病菌。要学习厌氧培养的新技术,指导临床正确采样和输送标本。 
  2. 厌氧培养的基本条件:(1)标本采集及运送:任何标本采用床边连接种均是可取的,不能及时送检的标本,必须立即种入输送培养基,在允许时间内送检。胸腔、膀胱穿刺液,深部脓肿分泌物。女性殖器后穹隆穿刺物、坏死组织,均可作为厌氧标本。但咳出的痰、支气管分泌物、咽拭子及尿液,均不能作为厌氧菌培养标本。粪便标本只能用于难辨梭菌培养。(2)厌氧菌培养必备的基础培养基:斯氏琼脂加5%羊血,适用于所有厌氧菌生长。斯氏血琼脂加万古霉素可用于革兰阴性厌氧细菌的分离。 
  在进行有目标性厌氧菌培养时,实验室可配制几种选择性培养基。如阿米卡星、万古霉素溶血平板,适用于类杆菌属的分离。阿米卡星胆盐七叶苷培养基,适用于脆弱类杆菌的分离。难辨梭菌分离培养基用于难辨梭菌的分离。(3)厌氧菌的鉴定,根据实验室的条件不同,分别建立1、2、3级的鉴定。1级鉴定可根据耐氧试验结果、革兰染色反应、菌落特点,提供厌氧菌初步推断报告。2级鉴定根据革兰染色、镜下形态、菌落特点及传统生化反应初步鉴定到种。3级鉴定采用国际公认的标准化鉴定系统,如API 20 A、MICRO-OID、VITEK-ANI、气液色谱仪等设备鉴定。(4)厌氧菌药敏试验:厌氧菌感染以经验用药为主,因为厌氧菌对现已上市的药物的敏感性有非常合理的预测性。厌氧菌的药敏试验耗时太长(4-6d),因此一般情况下不需要作药敏试验。当经验用药无效,或评价一种新的抗厌氧菌药物,或耐药监测时也需要做药敏试验。当大批量样品检测时,采用琼脂稀释法最为理想,但当个别菌株需做药敏试验时,用Etest法或ATB的ANA试条的方法较为方便。(5)厌氧菌的菌种保存:一般在以下3种情况下需要保存菌株,如疑难菌株的回顾性鉴定,需要用菌株制备生物制品或用于科研的菌株需要长期保存。不同类别厌氧菌保存方法不同,如革兰阳性芽孢杆菌可用蒸馏水低温保存。革兰阳性厌氧球菌或杆菌采用血液低温保存较好。-40℃以下较为合适,因为在低温时新陈代谢处于抑制状态,不繁殖、不死亡,并且血液在低温下可形成低氧化还原电势。冷冻干燥保存菌株适用于所有厌氧菌。 五、厌氧细菌学研究进展及展望 

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