厌氧菌的分离培养浅谈

初代培养的一般原则是:  
  (1)先将标本涂片染色直接镜检,指导培养基的选择。    (2)尽量选用在厌氧菌中覆盖面宽的非选择性培养基。    (3)**好多选1~2种覆盖面不同的选择性培养基。    (4)尽量保证培养基新鲜。  
  (5)要考虑到微需氧菌存在的可能。  
  1.选用适当的培养基接种:应接种固体和液体两种培养基;    (1)培养基的使用,应注意下列各点:    1)尽量使用新鲜培养基,2~4h内用完;  
  2)应使用预还原培养基,预还原24~48h更好;  
  3)可采用预还原灭菌法制作的培养基(用前于培养基中加入还原剂,如L-半胱氨酸、硫乙醇酸钠、维生素C及葡萄糖等,尽可能使预还原剂处于还原状态);    4)液体培养基应煮沸10min,以驱除溶解氧,并迅速冷却,立即接种;    5)培养厌氧菌的培养基均应营养丰富,并加有还原剂与生长刺激因子(血清、维生素K、氯化血红素、聚山梨酯-80等)。  
  (2)培养基的选择:初次培养一般都使用选择培养基和非选择培养基。  
  1)非选择培养基:本培养基使分离的厌氧菌不被抑制,几乎能培养出所有的厌氧菌。常使用心脑浸液琼脂(BHI)、布氏琼脂(BR)、胰豆胨肝粉琼脂(GAM)、胰胨酵母琼脂(EG)、CDC厌氧血琼脂等。  
  2)选择培养基:为有目的选择常见厌氧菌株,以便尽快确定厌氧的种类。  
  2.每份标本**少接种3个血平板,分别置于有氧,无氧及5%~10à2环境中培养,以便正
确地培养出病原菌,从而判断其为需氧菌、兼性厌氧菌、微需氧菌或厌氧菌中的哪一类。   3.厌氧培养法   (1)厌氧罐培养法。   (2)气袋法。   (3)气体喷射法:又称转管法。   (4)厌氧手套箱培养法:是迄今厌氧菌培养的**佳仪器之一。   (5)其他培养法:平板焦性没食子酸法;生物耗氧法;高层琼脂培养法。   4.厌氧状态的指示:美蓝和刃天青。无氧时均呈白色,有氧时美蓝呈蓝色,刃天青呈粉红色。   5.分离培养厌氧菌失败的原因:①培养前未直接涂片和染色镜检;②标本在空气中放置太久或接种的操作时间过长;③未用新鲜配制的培养基;④未用选择培养基;⑤培养基未加必要的补充物质;⑥初代培养应用了硫乙醇酸钠作为**厌氧菌培养基;⑦无合适的厌氧罐或厌氧装置漏气;⑧催化剂失活;⑨培养时间不足;⑩厌氧菌的鉴定材料有问题。

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