厌氧菌的分离培养原则介绍

厌氧菌的分离培养主要分初代培养和次代培养两个阶段,其中初代培养相对比较困难,关键的问题就是厌氧环境和培养基的选择。 
初代培养的一般原则是: 
(1)先将标本涂片染色直接镜检,指导培养基的选择。 (2)尽量选用在厌氧菌中覆盖面宽的非选择性培养基。 (3)最好多选1~2种覆盖面不同的选择性培养基。 (4)尽量保证培养基新鲜。 (5)要考虑到微需氧菌存在的可能。 
1.选用适当的培养基接种:应接种固体和液体两种培养基; (1)培养基的使用,应注意下列各点: 1)尽量使用新鲜培养基,2~4h内用完; 2)应使用预还原培养基,预还原24~48h更好; 
3)可采用预还原灭菌法制作的培养基(用前于培养基中加入还原剂,如L-半胱氨酸、硫乙醇酸钠、维生素C及葡萄糖等,尽可能使预还原剂处于还原状态); 
4)液体培养基应煮沸10min,以驱除溶解氧,并迅速冷却,立即接种; 
5)培养厌氧菌的培养基均应营养丰富,并加有还原剂与生长刺激因子(血清、维生素K、氯化血红素、聚山梨酯-80等)。 
(2)培养基的选择:初次培养一般都使用选择培养基和非选择培养基。 
1)非选择培养基:本培养基使分离的厌氧菌不被抑制,几乎能培养出所有的厌氧菌。常使用心脑浸液琼脂(BHI)、布氏琼脂(BR)、胰豆胨肝粉琼脂(GAM)、胰胨酵母琼脂(EG)、CDC厌氧血琼脂等。 
2)选择培养基:为有目的选择常见厌氧菌株,以便尽快确定厌氧的种类。 
 
 
2.每份标本至少接种3个血平板,分别置于有氧,无氧及5%~10à2环境中培养,以便正确地培养出病原菌,从而判断其为需氧菌、兼性厌氧菌、微需氧菌或厌氧菌中的哪一类。 
3.厌氧培养法 (1)厌氧罐培养法。 (2)气袋法。 
(3)气体喷射法:又称转管法。 
(4)厌氧手套箱培养法:是迄今厌氧菌培养的最佳仪器之一。 
(5)其他培养法:平板焦性没食子酸法医学教育网搜集|整理;生物耗氧法;高层琼脂培养法。 
4.厌氧状态的指示:美蓝和刃天青。无氧时均呈白色,有氧时美蓝呈蓝色,刃天青呈粉红色。 
5.分离培养厌氧菌失败的原因:①培养前未直接涂片和染色镜检;②标本在空气中放置太久或接种的操作时间过长;③未用新鲜配制的培养基;④未用选择培养基;⑤培养基未加必要的补充物质;⑥初代培养应用了硫乙醇酸钠作为唯一厌氧菌培养基;⑦无合适的厌氧罐或厌氧装置漏气;⑧催化剂失活;⑨培养时间不足;⑩厌氧菌的鉴定材料有问题。

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