厌氧培养箱操作规范

一、 操作室厌氧环境形成

1.按使用要求放置好必要的配件和器具,并向操作室内放入二个无毒塑料袋。

2.通电源开照明灯,开控温仪,调节所需温度及安全温度。

3.操作室内放入1000g钯粒(封闭)和500g干燥剂,并放入美兰指示剂(封闭)。

4.关紧取样室内外门,并抽真空校验。

5.操作室内第一次置换(氮气置换):

(1)先用橡皮管插入操作室内进气口,另一头插入塑料袋。

(2)接通氮气进气路,打开氮气控制阀,使二只塑料袋充足氮气,然后扎紧袋口。

(3)把乳胶手套套在观察板法兰圈上并扎紧。

(4)把塑料袋内氮气渐渐地放于操作室内,至全部放出。

6.操作室第二次置换(氮气置换)重复一 次充氮过程,并注意随时用脚踏开关开闭排气。

7.操作室第三次置换(混合气体置换):

(混合气体配比为:N2:H2:CO2=85%:10%:5%)

(1)调换气路打开混合气道通阀门进气,充气时要随时脚踏开关开闭排气。

(2)混合气充满塑料袋后,关掉混合气直通阀(三通阀),使混合气经过流量计输入操作并调整流量计,流量为每分钟10毫升左右。

(3)把塑料袋内混合气渐渐排于操作室内。

(4)通过三次换气后,操作室内气体含氧量已处于极微量状态。

8.操作室内打开钯粒除氧剂,接通除氧催化器电源进行催化除氧,一 小时后打开美兰指示剂(美兰安瓶)观察其变色情况,不变色为操作室内达到厌氧环境。

9.开紫外线灭菌灯,室内进行灭菌处理。灭菌时间自定。

二、 菌种的置入和培养

1.检查取样室内门并关紧。

2.打开取样室外门,将菌种放入取样室后即关上外门。

3.取样室充氮置换三次过程:先抽真空度500毫米汞柱(66Kpa)以上停,然后人工打开氮气阀门进气,使指针回复零位后进行下次操作。

4.如选定真空度较低就需要增加置换的次数。

5.取样室内外门开启,关紧要抽低真空度100毫米汞柱(13Kpa)检验及帮助操作。

6.厌氧培养箱需要长期连续使用的条件:

(1)每天在操作室内打开美兰指示剂观察,正常情况下使用。如不正常就必须重新换气。

(2)要长期连续输入微量的混合气体,使补进的氢气能和微量的氧结合通过催化吸收,保证了室内厌氧状态,补入混合气流量选定为每分钟10毫升左右。

(3)连续培养运行一 天,更换一 次除氧剂和干燥剂。

7.接种棒灭菌器的应用:

(1)随时用镍铬电热丝使电极短路而变赤热以进行杀菌(接种棒)

(2)熔蜡处可直接放上,试管封蜡口旋转熔蜡。

8.操作室里的培养箱内的温度可任意选择和控制。

9.混合气瓶、氮气瓶输出压力调整:调节减压阀,使输出压力为0.1Mpa左右。

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